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    【干貨】菌落總數的錯誤操作,你中招了沒?

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    菌落總數是評價食品衛生質量的重要指標,其檢測工作在某種程度上具有相當的不可比性,這就要求檢測人員要嚴格執行科學的操作程序。國家標準GB 4789.2中只是簡要提到了檢測程序,對實際操作過程中容易出現的問題未作詳細說明。今天分享一下檢測中容易出現的問題,看看你中招了沒?

     

    01

    樣品的制備和稀釋倍數的選擇

     

    對于冰凍的樣品,在接種前要放到0~4℃的冰箱中解凍。固體樣品要用滅菌刀或鑷子從不同部位采取試驗材料并混合,在無菌操作下充分研細,混勻,做成均勻稀釋液。樣品制備的整個過程都應在無菌狀態下進行,以防污染。任何樣品在打開包裝前,都要在取樣開口處的周圍表面進行消毒。錯誤操作是:冰凍樣品的解凍時間過長,導致細菌增殖,使實測結果偏高;固體樣品取樣不均衡,稀釋液未充分混勻,使所測結果準確度降低;取樣時未進行外包裝消毒,引起樣品污染。

     

    充氣飲料應在無菌條件下進行排氣;酸性樣品用經過滅菌的20~30% 碳酸鈉溶液調整pH值到中性;含鹽量較高的樣品應用滅菌蒸餾水進行稀釋。誤操作是:充氣飲料未經排氣,使樣品接種量偏低;酸性樣品未調pH值,使不適合酸性狀態下生長的細菌受抑制;高鹽樣品仍用生理鹽水進行稀釋,使不適于高鹽狀態下生長的細菌受抑制,結果均使實測值偏低。

     

    不同的食品其「菌落總數」的檢出限量也不一致。醬油、奶制品、熟肉制品等細菌含量一般偏高,稀釋度可相應選擇較大的,如1:100 和1:1000 等,而飲料、糕點類樣品中細菌量偏低,稀釋度應選擇較小的,如液體樣品可選原樣,固體樣品選1:10 等。錯誤操作是:選擇的稀釋度過大,使得菌落生長稀少,或者稀釋度過小,菌落生長密度高,難以計數,導致實測結果或偏高或偏低。

     

    02

    接種、培養過程中應注意的問題

     

    接種時,用移液管吸取稀釋液不應用吸球,而要用管口上部塞有脫脂棉球的經過高溫烘烤的移液管,以防產生交叉污染。稀釋液加入平皿后,應在盡可能快的時間內傾入瓊脂(傾倒瓊脂時,應保證瓊脂溫度在50~60℃,溫度過高,易殺死細菌;溫度過低,則瓊脂提前凝固,導致檢測失。,并立即在桌面上推旋平皿,使樣液與瓊脂混合均勻,切忌推旋動作過大,將瓊脂濺到平皿蓋上,影響測定結果。

     

    平皿內瓊脂凝固后,不要長久放置后才翻轉平皿培養,而應在瓊脂凝固后立即將平皿翻轉予以培養,這樣可避免菌落蔓延生長,難以計數。
    配制、分裝稀釋液或傾注平板不能在日光直射下進行,以防強烈的日光將細菌殺死。


    在培養時,恒溫培養箱的溫度不能過高,以免出現蔓延生菌的趨勢,但也要防止因通風和空氣循環而造成的培養基太干,而影響細菌的正常生長。

     

    03

    滅菌消毒過程中應注意的問題

     

    細菌檢測過程中所用到的一切用具和培養基都需經過滅菌程序。接種室要經常用消毒液進行地面、墻面和桌面的消毒處理。實驗進行前,還要經紫外燈照射殺菌。檢測人員的實驗服也要經常用消毒液浸泡消毒。凡是能在高溫下烘烤的玻璃器皿、金屬器械等都應用專用紙包好并在170℃烘烤3小時以上,以徹底滅菌。培養基和液體試劑,則要在高壓鍋內進行滅菌。高壓鍋使用時應注意在升壓前要放凈鍋內殘存的空氣,以保證所需的壓力,達到滅菌效果。滅菌效果的好壞可通過空白試驗確定。空白試驗有空氣空白、稀釋用水空白、器皿空白等,完美的空白試驗平板上應該無細菌生長。


    04

    菌落計數和檢測結果報告中應注意的問題

    1

    菌落計數在完成培養后應立即進行,以防細菌繼續生長蔓延影響實測結果。由于不小心、視力疲勞或菌落沒有辨認好,均可導致錯誤的結果,因此,檢測人員在計數時應采取多人同時進行計數的方法,以避免這種情況造成的誤差。


    如果所有稀釋度的平板均無細菌生長,則檢測報告應以最低稀釋度報出,如最低稀釋度為1,則報為<1;若最低稀釋度為1:10,則報為<10,而不能報為「未檢出」。


    以上所描述內容,均是在實際檢測「菌落總數」過程中易發生錯誤操作之處。只有檢測人員嚴格按要求進行實際操作,避免產生上述錯誤,才能保證科學、準確地得出符合樣品實際的檢測結果,體現技術監督檢測工作的科學性和公正性。

     

    這些錯誤,你中過招嗎?

     

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